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核酸纯化试剂使用方法及注意事项

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  • 来源:
  • 发布时间:2021-10-26
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【概要描述】核酸纯化试剂是我们实验室常用的实验,常说的核酸纯化是指分离核酸物质DNA/RNA和蛋白质、多酚、多糖等其他高分子物质,那么,下面一起了解下核酸纯化试剂使用方法及注意事项吧!

核酸纯化试剂使用方法及注意事项

【概要描述】核酸纯化试剂是我们实验室常用的实验,常说的核酸纯化是指分离核酸物质DNA/RNA和蛋白质、多酚、多糖等其他高分子物质,那么,下面一起了解下核酸纯化试剂使用方法及注意事项吧!

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  核酸纯化试剂是我们实验室常用的实验,常说的核酸纯化是指分离核酸物质DNA/RNA和蛋白质、多酚、多糖等其他高分子物质,那么,下面一起了解下核酸纯化试剂使用方法及注意事项吧!

  01、保持核酸分子一级结构的完整性

  02、尽量排除其他分子的污染,保证核酸样品的纯度

  细胞分裂

  1、物理作用:低渗透分解、超声波分解、冻融分解、研磨、匀浆等。 用玻璃珠、超声波、研磨等方法破碎细胞;

  2、化学作用: CTAB法、SDS处理等;

  烷基三甲基溴铵是阴离子清除剂,溶解细胞膜,与核酸形成复合体。 该复合体可溶于高盐溶液,可用有机溶剂提取,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后,加入乙醇沉淀,从而分离核酸。

  碱分解法是质粒DNA的常用提取方法。 染色体DNA远大于质粒DNA分子,染色体DNA为线状分子,而质粒DNA为共价键环状分子。 用碱处理DNA溶液时,线状染色体DNA容易变性。 共价键环状质粒DNA恢复中性PH后恢复天然构象,变性染色体DNA的片段与变性蛋白质和细胞片段结合沉淀,成为具有复性的超螺旋质粒DNA

  3、酶作用:加入溶菌酶和蛋白酶等

  在纯化具有细胞壁的微生物样本时,加入溶菌酶等溶解细胞壁,进行以下分离和纯化。 蛋白酶k是从白色中分离出来的强力蛋白溶解酶,用于清除核酸酶和其他蛋白污染。

  分离和纯化

  1、加入浓盐溶液:盐浓度不同的溶液中,DNA、RNA的溶解度不同

  2、加入SDS :将核酸从蛋白质上游分离出来

  3、萃取:疏水性蛋白在有机相中,核酸残留在上层水相中

  4、硅胶吸附:硅胶膜吸附核酸

  5、磁珠吸附:利用磁珠选择性吸附核酸

  分离方法的优缺点:

  1、RNA回收效率高、耗时长、不利于自动化,也不利于基因组DNA污染

  2、盐析法:产量低,不适合自动提取

  3、硅胶吸附法:纯度高、简单方便、无毒性、可自动化

  4、磁珠吸附法:产量高、纯度好,可以实验特异种的核酸分离,可以自动化

  5、加热煮沸法:只用于纯化DNA,成本低、纯度低、产量低

  清洗和溶解

  清洗:进一步除去杂质,通常使用75%乙醇

  溶解:一般使用无核酸酶水或TE缓冲液

  核酸纯化试剂相关注意事项

  1、纯化试剂尽量使用新鲜样品,避免反复冻融

  2、标本用量要严格按照试剂或试剂盒的说明书执行,以免影响提取效果3、DNA纯化用试剂、消耗品需要高温高压灭菌,RNA纯化用消耗品需要RNase失活处理

  4、高温高压灭菌、EDPC浸渍、无RNase消耗品

  5、RNA纯化的所有试剂均使用DEPC水或无RNase水制备

  6、DNA纯化操作必须轻柔避免DNA链断裂,RNA纯化必须充分搅拌涡旋以保证提取效果

  7、异丙醇、乙醇等需要预冷以减少DNA的分解,促进DNA和蛋白的分相和DNA的沉淀。 工作人员必须戴上一次性手套、口罩,仔细更换手套,不可以打开门窗。

  以上介绍的就是核酸纯化试剂使用方法及注意事项,如需了解更多,可随时联系我们!

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