RNA纯化试剂是怎么进行应用的?
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- 来源:
- 发布时间:2021-11-30
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【概要描述】RNA纯化试剂适用于从血清、细胞上清液和淋巴中提取RNA病毒基因组,但不适用于从细胞和其他组织中提取RNA病毒基因组。RNA纯化试剂提取的基因组核糖核酸可用于逆转录聚合酶链反应实验。
RNA纯化试剂是怎么进行应用的?
【概要描述】RNA纯化试剂适用于从血清、细胞上清液和淋巴中提取RNA病毒基因组,但不适用于从细胞和其他组织中提取RNA病毒基因组。RNA纯化试剂提取的基因组核糖核酸可用于逆转录聚合酶链反应实验。
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RNA纯化试剂适用于从血清、细胞上清液和淋巴中提取RNA病毒基因组,但不适用于从细胞和其他组织中提取RNA病毒基因组。RNA纯化试剂提取的基因组核糖核酸可用于逆转录聚合酶链反应实验。
下面我们一起来看看RNA纯化试剂操作步骤:
RNA纯化试剂使用前,请在冲洗液中加入一瓶新打开的无水乙醇,加至距离瓶口约0.5-1cm处,盖上盖子,摇匀。所有离心步骤都在2-8下进行。
1.取0.5毫升病毒上清液,以12000转/分离心5min,尽可能吸收上清液,弃去沉淀(如无沉淀,可省略此步骤)。
2.向病毒上清液中加入20微升10毫克/毫升蛋白酶K,混合均匀,在65消化10分钟,倒置离心管混合几次。
3.吸附柱预处理:将吸附柱从包装中取出,放入收集管中,加入700微升洗柱液,室温静置2分钟,2-8离心2分钟,转速12000转/分,弃去废液,将吸附柱放入收集管中备用。
4.向病毒上清液中加入500微升结合溶液,并充分混合。然后在试管中加入400微升无水乙醇,混合均匀。此时可能会出现絮凝剂,不会影响RNA提取。将溶液和絮状沉淀加入吸附柱,静置2分钟。(吸附柱大体积为750ul,可分两次加入。第一次吸附和离心后,将剩余的混合液加入柱中,静置离心。)
5.以12000转/分钟离心2分钟,弃去废液,将吸附柱放入收集管。
6.向吸附柱中加入700微升冲洗液(使用前请检查是否已加入无水乙醇),以12000转/分钟离心1分钟,然后丢弃。废液,将吸附柱放入收集管。
7.向吸附柱中加入500微升冲洗液,以12000转/分钟离心1分钟,弃去废液,将吸附柱放入收集管中。
8.以12000转/分钟离心2分钟,将吸附柱置于室温或50培养箱中几分钟,以冲洗吸附柱中的残留物。否则冲洗液中的乙醇会影响后续的酶切、PCR等实验。
9.将吸附柱放入干净的离心管中,将50ul-100ul在65水浴中预热的游离RNase DDH2O滴入吸附膜中心,室温放置5min,以12000转/分钟离心2min。并且可以获得高质量的病毒基因组RNA。
以上就是关于RNA纯化试剂的一些知识点,随着科学技术的进步,更多优秀的产品将会层出不穷,希望可以帮助大家了解到相关信息,从而选择合适自己需求的产品。
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